導(dǎo)讀：基于間充質(zhì)干細(xì)胞的易培養(yǎng)性以及多向分化潛能，被大規(guī)模應(yīng)用于治療各種疾病的臨床研究上，為乙肝患者帶來新的希望。間充質(zhì)干細(xì)胞通過低免疫原性、自我更新能力、多向分化潛力以及分泌多種細(xì)胞因子的能力，使得它們在促進(jìn)肝組織修復(fù)和再生方面具有獨(dú)特優(yōu)勢，被用于乙肝患者的細(xì)胞替代療法。

乙型肝炎病毒(HBV)是我國最常見的致病病毒之一，其發(fā)病率較高，主要危害是肝硬化和肝細(xì)胞瘟。由于肝硬化過程不可逆，肝移植是肝硬化失代償期患者治愈的唯一方法。

但由于住院費(fèi)用高、移植手術(shù)風(fēng)險高以及術(shù)后持續(xù)的免疫抑制治療，導(dǎo)致只有少數(shù)肝硬化失代償期患者能夠接受肝臟移植以獲得更好的生活，每年國內(nèi)外醫(yī)院都會接收大量肝硬化患者，但治療效果并不令人滿意，大部分患者死于肝功能衰竭、肝性腦病、食管胃底靜脈曲張出血、肝腎綜合征等并發(fā)癥。

因此科研人員努力尋求一種新的、安全、有效的治療方法，為不能接受肝移植或需要長時間等待肝移植的患者提高生活質(zhì)量，延長生存期。

近年來隨著再生醫(yī)學(xué)的不斷發(fā)展，干細(xì)胞移植的出現(xiàn)，以其獨(dú)特的生物學(xué)特性，為肝病治療帶來新的治療思路。

與胚胎干細(xì)胞相比，間充質(zhì)干細(xì)胞的使用避免了倫理爭議，同時降低了潛在的致瘤風(fēng)險。由于間充質(zhì)干細(xì)胞具有低免疫原性、自我更新能力、多向分化潛力以及分泌多種細(xì)胞因子的能力，使得它們在促進(jìn)肝組織修復(fù)和再生方面具有獨(dú)特優(yōu)勢。間充質(zhì)干細(xì)胞移植也成為了治療乙肝的一種極具吸引力的治療選擇。

內(nèi)蒙醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院：干細(xì)胞治療11例乙肝肝硬化患者療效表現(xiàn)較好

內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院的臨床研究人員在行業(yè)權(quán)威期刊《臨床肝病學(xué)雜志》上發(fā)表了一篇關(guān)于《人臍帶 血單個核細(xì)胞聯(lián)合人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞療法對乙型肝炎肝硬化患者肝功能、炎癥程度及免疫功能的影響》的臨床研究報告。^【1】

該報告主要目的是探討人臍帶血單個核細(xì)胞聯(lián)合人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對乙型肝炎相關(guān)失代償期肝硬化患者的肝功能、炎癥程度及免疫功能的影響。

方法：研究人員選取2016年11月—2019年6月在內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院診治的11例乙肝肝硬化患者，所納入患者第1周輸注1次hUCB－MNCs（＞18×10⁹／次），第2、3、4周每周輸注1次hUC－MSCs，每次輸注1×10⁶/kg。

在治療結(jié)束的第4、8、12周進(jìn)行復(fù)查，對比治療前后肝功能、血氨、凝血因子、血清細(xì)胞因子及淋巴細(xì)胞亞群的變化，同時觀察記錄神經(jīng)、精神癥狀的改變。 計(jì)量資料組間比較采用單因素重復(fù)測量方差分析。

結(jié)果

1. 輸注前后及不同時間對肝功能、血氨及其他狀況的影響

PT（Prothrombin Time）是指凝血酶原時間；PTA（Prothrombin Activity）是指凝血酶原活性。

在hUCB－MNCs聯(lián)合hUC－MSCs輸注結(jié)束后，對PT和PTA影響最快，細(xì)胞輸注結(jié)束后第4周即可顯著改善（P值均＜0.05），而患者的肝功能酶學(xué)指標(biāo)在細(xì)胞輸注后第8周逐漸恢復(fù)到正常水平（P值均＜0.05），在輸注結(jié)束第12周時，肝功能指標(biāo)較之前明顯好轉(zhuǎn)（P值均＜0.01）（表２）。

細(xì)胞輸注4周后，患者血清中血氨濃度明顯降低（P＜0.05），隨著時間的延長，血氨水平持續(xù)下降，除患者No. 7、10、11外，其他患者在hUCB－MNCs和hUC－MSCs輸注12周后均降低到正常水平（P值均＜0.05）（表3）。

Child-Pugh評分是一種用于評估肝硬化患者肝臟功能的臨床評分系統(tǒng)。

細(xì)胞輸注后第4、8周，5例肝硬化腹水患者的腹水均有所減少，除卻No. 10患者仍有少量腹水，且Child-Pugh分級仍然處于C級。10例患者的乏力、食欲、睡眠、精神、腹脹、下肢水腫等明顯改善，血清膽紅素及PT基本恢復(fù)正常，血清ALB也明顯升高，Child-Pugh評分隨之降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P值均＜0.05）（表4）。

2. 對血清細(xì)胞因子和淋巴細(xì)胞亞群的影響

ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）是一種常用的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)，用于檢測和定量樣品中的特定蛋白質(zhì)、抗體或其他抗原。

IL-6是指白細(xì)胞介素6；TNFα是指腫瘤壞死因子α

TGF-β（Transforming Growth Factor-β）是一組多功能的細(xì)胞因子，在肝病中，能抑制肝細(xì)胞的增殖

采集患者靜脈血，ELISA定量檢測hUCB－MNCs和hUC－MSCs輸注前后血清炎性和抗炎細(xì)胞因子的含量，結(jié)果顯示輸注4周后患者血清炎性細(xì)胞因子IL-6、TNFα水平均明顯降低（P值均＜0.01），從8到12周，其血清中含量持續(xù)維持在正常水平；患者血清抗炎細(xì)胞因子IL－10、TGF-β在治療后4周顯著上升（P值均＜0.01），4周后基本恢復(fù)到正常值，到治療后的12周，其表達(dá)水平一直維持在正常值（表5）。

CD3+CD4+ T淋巴細(xì)胞，通常稱為輔助T細(xì)胞（Helper T cells, Th cells），是免疫系統(tǒng)中的關(guān)鍵細(xì)胞類型。

CD4+CD25+ Treg細(xì)胞，也稱為調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Regulatory T cells, Tregs），是一群具有免疫調(diào)節(jié)功能的T細(xì)胞亞群。

CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞，通常稱為細(xì)胞毒性T細(xì)胞（Cytotoxic T cells, CTLs），是免疫系統(tǒng)中負(fù)責(zé)識別和殺死受病毒感染細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞的主要細(xì)胞類型。

CD19+ B淋巴細(xì)胞是免疫系統(tǒng)中的另一種主要細(xì)胞類型，它們負(fù)責(zé)產(chǎn)生抗體，參與體液免疫反應(yīng)。

采用流式細(xì)胞儀分析淋巴細(xì)胞亞群比例，細(xì)胞輸注對CD3+T淋巴細(xì)胞無明顯影響，輸注4周后CD3＋CD4+T淋巴細(xì)胞和CD4＋CD25＋Treg顯著升高（P值均＜0.01）；而對CD3＋CD8+T淋巴細(xì)胞和CD19＋B淋巴細(xì)胞具有較明顯的抑制作用，此狀態(tài)一直維持至12周（表5）。

安全性評估：截至目前，11例入組治療患者均未發(fā)現(xiàn)明顯的不良反應(yīng)。

綜上所述，hUCB-MNCs聯(lián)合hUC-MSCs治療肝硬化，與細(xì)胞輸注前相比較，可改善肝功能，減少炎性細(xì)胞因子產(chǎn)生，減輕肝臟炎癥反應(yīng)以及肝細(xì)胞的破壞，升高免疫調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞，從而影響其自身免疫功能。

討論

研究發(fā)現(xiàn)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（hUC－MSCs）能夠向多方向分化，如神經(jīng)、骨骼、肌肉、心肌、肝細(xì)胞等^［2］，同時具有強(qiáng)大的修復(fù)功能^［3］。而hUC－MSCs輸入后，可以歸巢到肝臟，分化為肝細(xì)胞或進(jìn)入肝臟后修復(fù)受損的肝細(xì)胞，血液內(nèi)的有毒物質(zhì)可以被代謝并排除體外，從而起到治療乙肝肝硬化的作用。

本研究結(jié)果證實(shí)，人臍帶血單個核細(xì)胞（hUCB－MNCs）和人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（hUC－MSCs）聯(lián)合輸入4周后，部分患者的血氨下降，肝硬化癥狀逐步得以控制；除此之外，hUC－MSCs還可以分化為神經(jīng)細(xì)胞，同時具有強(qiáng)大的修復(fù)神經(jīng)細(xì)胞損傷的功能^［4-5］，所以hUC－MSCs輸入后肝硬化患者精神、神經(jīng)狀態(tài)不佳的情況相應(yīng)減輕，筆者推斷可能與此也有一定的關(guān)系，有待進(jìn)一步驗(yàn)證。

結(jié)論

綜上所述人臍帶血單個核細(xì)胞和人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞聯(lián)合輸注可以分化為肝細(xì)胞或進(jìn)入肝臟后修復(fù)受損的肝細(xì)胞，抑制炎性因子釋放，上調(diào)Treg水平，從而調(diào)節(jié)肝硬化患者免疫功能，改善患者一般狀態(tài)。

這些研究結(jié)果為人臍帶血單個核細(xì)胞和人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞聯(lián)合療法可以優(yōu)化肝功能且抑制病情發(fā)展提供了有力的依據(jù)。

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【1】韓曉, 云莎. 臍血單個核細(xì)胞與臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞聯(lián)合治療對乙肝肝硬化患者肝功能、炎癥分級及免疫功能的影響[J].臨床肝病雜志, 2021, 37(8): 1822-1828. DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2021.08.016 .

【2】Yan Junqing, Han Tao, Zhu Zhengyan. Biological characteristics of human umbilical cord mesenchymal stem cells and their differentiation into hepatocyte-like cells[J]. World Chinese Journal of Digestion, 2008, 16(15) ： １６３９ － １６４４。 ＤＯＩ： １０。 ３９６９/ｊ。 ｉｓｎ。 １００９ －３０７９。 ２００８。 １５。 ００９。

【3】SHAN YB,FAN YW,SHl HC,et al. progress of mesenchymalstem cells in tissue engineering trachea[J]. Int J BiomedEng,2017,40(3):211-215.DOl:10.3760/cma.j.issn.1673-4181.2017.03.014.

【4】WAKAO S，MATSUSE D，DEZAWA M.Mesenchymal stemcells as a source of Schwann cells: Their anticipated use inperipheral nerve regeneration [J]. Cells Tissues Organs,2014，200(1):31-41.DO1:10.1159/000368188.

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